Manutenzione e metodo di utilizzo del tubo di ultrafiltrazione
Manutenzione e metodo di utilizzo del tubo di ultrafiltrazione
Funzione del tubo di ultrafiltrazione:
1) Concentrazione; 2) Dissalazione; 3) Sostituire il buffer; 4) Ha l'effetto di purificazione parziale.
1. Il nuovo tubo di ultrafiltrazione può essere utilizzato direttamente senza altri trattamenti;
2. Il tubo di ultrafiltrazione non può essere sterilizzato ad alta temperatura;
3. Trattamento del tubo di ultrafiltrazione quando si cambiano le proteine concentrate
Il tubo di ultrafiltrazione può essere riutilizzato. Immergerlo in 0,1 M NaOH per 1-2 ore, lavarlo con acqua e quindi lavarlo con la soluzione pertinente (acqua sterilizzata o PBS) sulla centrifuga per 3 volte, che può essere utilizzato per concentrare nuove proteine;
4. Trattamento del tubo di ultrafiltrazione normalmente posizionato
Per il tubo di ultrafiltrazione di uso frequente, immergerlo in 0,1 M NaOH per 1-2 ore, lavarlo con acqua e immergerlo in acqua sterilizzata. Assicurati di mantenere la membrana del filtro bagnata e impedire la crescita dei batteri;
5. Trattamento del tubo di ultrafiltrazione posto a lungo
Se il tubo di ultrafiltrazione non viene utilizzato per un lungo periodo, immergerlo in 0,1 M NaOH per 1-2 ore, lavarlo con acqua e immergerlo in etanolo al 20% per la conservazione. Assicurati di mantenere la membrana del filtro bagnata e impedire la crescita dei batteri;
6. Velocità centrifuga utilizzata per il tubo di ultrafiltrazione
La velocità centrifuga è generalmente di 4000 giri/min (3000g è generalmente consigliato, e il massimo non può superare i 4000g). Dopo la centrifugazione per 5-8 minuti, il campione da 4 ml può essere concentrato a meno di 1 ml a dozzine di microlitri; Se la velocità è troppo alta, la proteina bersaglio cadrà, con conseguente perdita di proteina bersaglio; Bassa velocità, dispendioso in termini di tempo e bassa efficienza del lavoro;
7. Precauzioni quando la testa della pistola si estende nel tubo di ultrafiltrazione
Quando si aggiunge soluzione proteica o tampone al tubo di ultrafiltrazione, è possibile utilizzare la testa della pistola blu; Tuttavia, quando la proteina bersaglio concentrata viene assorbita dal fondo del tubo di ultrafiltrazione, deve essere utilizzata la testa della pistola gialla; Quando la testa della pistola viene inserita nel tubo di ultrafiltrazione, deve essere impedito di toccare la membrana del filtro per evitare di forare la membrana del filtro;
8. Ridurre la perdita di adsorbimento proteico del tubo di ultrafiltrazione
La membrana del tubo di ultrafiltrazione può assorbire proteine, che ridurranno la proteina bersaglio di circa il 30%; Al fine di ridurre la perdita di proteine, dopo aver assorbito la soluzione proteica bersaglio, spurgare il fondo del tubo di ultrafiltrazione con tampone proteico per lavare la maggior parte della proteina adsorbita dalla membrana del filtro e ridurre la perdita di proteine bersaglio; Se la proteina purificata è concentrata, prestare attenzione che il volume concentrato non debba essere troppo piccolo; Generalmente, non importa quanto centrifugato, circa 200 μ soluzione proteica L saranno trattenuti sul fondo;
9. Come definire il fallimento del tubo di ultrafiltrazione
Durante l'uso normale, quando la membrana filtrante non viene perforata, la soluzione proteica concentrata non contiene proteine o la quantità è molto bassa (compresa la proteina bersaglio), mentre la prima soluzione filtrata contiene proteine bersaglio, indica che la membrana filtrante non è valida e deve essere sostituita con un nuovo tubo di ultrafiltrazione.
